神经肽和生长因子对成骨细胞生物学行为的影响
李亚非 马文辉

材料与方法

1．试剂：降钙素基因相关肽（CGRP），血管活性肠肽（VIP），神经肽Y（NPY），P物质（SP）。人骨形态发生蛋白-2（hBMP-2）。PI染色剂终浓度为50μg/ml。RNA酶A终浓度为100μg/ml，
2．成骨细胞培养方法与鉴定：
3．神经肽对成骨细胞增殖的影响：
3.1. 分组与处理: 成骨细胞接种于多块24孔板内，各组分别在第3天与第5天又两次加入以上各因子，5%CO2孵箱37 OC孵育24小时后，进行各种检测。
3.2.流式细胞仪检测细胞增殖情况。
3.3.碱性磷酸酶（ALP）活性测定
3.4. 神经肽对成骨细胞合成骨钙素（BPG）的影响

结果

在24、48、72小时，各种肽及BMP可促进人成骨细胞增殖（P<0.01）。
综上所述，我们可知各种肽类因子及BMP均可刺激人成骨细胞的增殖，其中NPY与VIP的效果最明显，并且其作用与浓度成反比，但是关于其最佳作用浓度尚需进一步摸索。

讨论

大量的临床与实验观察表明：骨的生长、修复与再建均受神经系统的调控[11]。目前已发现的参与骨组织调节的神经肽类有CGRP、NPY、VIP、SP、TH五种。
以上对于五种肽类物质的研究绝大部分是在组织水平进行的，而在细胞水平，尤其具体到某一类型的细胞深入研究五种肽的作用的报道非常少。Bjurholm等[18]利用成骨样细胞UMR106进行的研究表明细胞表面具有CGRP、VIP、NPY、NA、PTH的受体，从而说明这些肽类可通过受体对细胞产生影响。Cranford等[19]报道CGRP可引起成骨细胞cAMP的动态升高。Hohmann等[20]的实验表明VIP可通过cAMP 依赖机制引起骨吸收，并进一步推测，这种效应是通过作用于成骨细胞受体，而后引起成骨细胞与破骨细胞之间的动态相互作用发生变化，最后导致的骨吸收。

本研究采用了正常人的成骨细胞，系统性地研究了五种肽对于成骨细胞生物学行为的影响。结果表明各种肽类物质均能不同程度地引起正常人成骨细胞的增殖，其中以NPY与VIP的效应最强。
以上的发现还是可以从一个侧面对肽类物质促进成骨的现象作出解释。这无疑是对骨组织的神经调控理论是一个必要的补充。另外，此研究中还显示两次使用肽类因子较一次使用的效果均有所增加，表明重复用药后会增加其对成骨细胞的促进效果，这对于以后进一步研究把肽类因子作为药物在临床中用来促进成骨有一定的意义。
BMP是一个公认的促成骨因子，并已应用于临床促进骨缺损的修复与愈合。在此研究中，BMP对正常人成骨细胞作用的结果是：其可促进成骨细胞增殖和分化，并且使细胞的BPG与ALP增加。从而在细胞水平解释了其成骨效能。我们还发现其成骨效能是与其浓度呈正相关的；两次用药后效应也会增加，这对于其现在的临床应用具有有益的指导意义。在此实验中我们还首次把五种肽类因子与已确认的成骨因子BMP联合应用于成骨细胞，结果表明复合作用均较各种因子单独作用时的效应有程度不同的减低。由于各种因子可能是通过受体发挥作用的，而关于它们受体的特异性方面未见报道，因此初步考虑上述现象是否是因为各因子作用于受体时具有相互拮抗作用而引起的，这有待于近一步的实验来证实。